大多數(shù)培養(yǎng)基需要在121℃下高壓滅菌15-30分鐘，只有少數(shù)介質(zhì)需要加熱溶解而不需要高壓滅菌。特別是無(wú)菌試驗(yàn)中培養(yǎng)基滅菌不徹底直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果。因此，有必要對(duì)高壓滅菌器的滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。
1試驗(yàn)數(shù)據(jù)
（1）嗜熱脂肪芽孢桿菌圓盤(pán)。嗜熱脂肪芽孢桿菌atcc7053是該方法常用的生物指示劑，其孢子大小為5-l05 CFU/片。
（2） 121℃壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡。
（3） 溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基在116℃滅菌20min后使用。
（4） 0-150℃保溫溫度計(jì)。
2方法與結(jié)果
用無(wú)菌鑷子將嗜熱脂肪芽孢桿菌圓盤(pán)（以下簡(jiǎn)稱(chēng)菌片）放入密封試管中。將化學(xué)指示卡和保留溫度計(jì)放入開(kāi)口管中。制備5-10份上述兩種試管。單獨(dú)放置在高壓滅菌器蒸氣口、底部排氣口和底部出水處，或上下左右各5個(gè)中心。如果高壓滅菌器為兩層，應(yīng)放置在10處。
保留點(diǎn)溫度計(jì)應(yīng)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化合格后方可用于檢定試驗(yàn)。測(cè)試前，溫度計(jì)的水銀柱應(yīng)在40℃以下?lián)u晃。每次監(jiān)測(cè)后，溫度計(jì)的溫差應(yīng)保持在1℃之間，說(shuō)明高壓滅菌器內(nèi)溫度分布均勻。
滅菌片應(yīng)置于滅菌的溴甲酚紫蛋白胨水介質(zhì)中，嚴(yán)格無(wú)菌操作條件，在56～60℃下培養(yǎng)24～48h，觀(guān)察顏色變化。如果培養(yǎng)基變黃，說(shuō)明平板中的嗜熱脂肪芽孢桿菌尚未完全滅活，細(xì)菌仍能在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，分化為葡萄糖，產(chǎn)酸變黃。如果培養(yǎng)基的基本顏色仍然是紫色，說(shuō)明孢子已經(jīng)失活。同時(shí)，未滅菌紙應(yīng)作為陽(yáng)性對(duì)照放入培養(yǎng)基中，空白紙無(wú)紙作為陰性對(duì)照。
化學(xué)指示卡上的色塊在高壓滅菌時(shí)由淺黃色變?yōu)楹谏Ｍㄟ^(guò)顏色的變化，并與對(duì)照色進(jìn)行比較，判斷滅菌效果是否符合要求。化學(xué)指示卡應(yīng)保存在干燥的地方。遇潮變色，影響滅菌效果觀(guān)察。
高壓蒸汽滅菌必須使蒸汽順利進(jìn)入高壓滅菌器，接觸滅菌物品，排出原有冷空氣。應(yīng)驗(yàn)證空載熱擴(kuò)散和滿(mǎn)載熱穿透（不超過(guò)滿(mǎn)載時(shí)總體積的2/3）。這兩個(gè)試驗(yàn)重復(fù)三次，共六次。5個(gè)點(diǎn)6次試驗(yàn)結(jié)果表明，溫度為121℃，化學(xué)指示卡變黑，程度與對(duì)照顏色一致，培養(yǎng)基顏色無(wú)變化，說(shuō)明高壓蒸汽滅菌合格。
高壓滅菌器屬于強(qiáng)制檢測(cè)儀器，但強(qiáng)制檢測(cè)只檢測(cè)儀器的物理參數(shù)。因此，有必要對(duì)經(jīng)過(guò)嚴(yán)格測(cè)試的高壓滅菌器的滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。有些單位經(jīng)常忽視這個(gè)重要問(wèn)題。市場(chǎng)上銷(xiāo)售的手提式滅菌器往往指針達(dá)到要求的溫度，但滅菌物品的實(shí)際溫度卻不符合要求。導(dǎo)致滅菌不徹底，影響檢測(cè)結(jié)果。培養(yǎng)基滅菌不徹底影響培養(yǎng)基的使用和結(jié)果的判斷。因此，有必要對(duì)高壓滅菌器的無(wú)菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。