除少數培養基只需加熱溶解，不需高壓滅菌外，大部分培養基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。尤其是對無菌試驗培養基滅菌不徹底，直接關系到試驗結果。因此必須認真對高壓滅菌器進行滅菌效果的驗證。
1．試驗材料
(1) 嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus stearothermophilus) ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-l05CFU/片。
(2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學指示卡。
(3) 溴甲酚紫胨水培養基116℃高壓滅菌20分鐘后備用。
(4) 0-150℃留點溫度計。
2．方法與結果
將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中。化學指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處。
留點溫度計標化合格后方可用于驗證試驗。檢測前，需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。每次監測后留點溫度計的溫差應存1℃之間，則說明滅菌器內的溫度分布是均勻的。
滅菌后的菌片應在嚴格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養基內56-60℃培養24-48小時，觀察顏色變化。如培養基變為黃色，說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活，細菌仍可在培養基中生長，分解葡萄糖產酸變為黃色。如培養基顏色不變化仍為紫色，則說明芽胞已滅活。同時要用未經滅菌的紙片放入培養基內作為陽性對照，不加紙片的空白培養基作為陰性對照。
化學指示卡上的指示色塊，在高壓蒸氣滅菌時，由淡黃色變為黑色。隨著顏色變化的深淺，并與對照色相比，可判斷滅菌效果是否達到要求。化學指示卡應在干燥處保存。遇潮會變色，影響滅菌效果的觀測。
高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進入滅菌器內，與滅菌物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達到滅菌的效果。要進行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗證各重復三次，共做六次。
5個點六次試驗表明溫度均在121℃，化學指示卡變黑；程度與對照色一致；培養基均未改變顏色，說明高壓蒸氣滅菌效果合格。
高壓滅菌器屬于強檢儀器，但強檢只是對儀器物理參數的考核。所以做過強檢的滅菌器還必須進行滅菌效果的驗證。一些單位常常忽略了這個重要的問題。國內市售的手提滅菌器，往往儀器指針達到所需的溫度，但滅菌物品的實際溫度卻未達到要求。導致滅菌物品不徹底，影響實驗結果。培養基滅菌不徹底，影響培養基的使用及結果判斷。因此高壓蒸氣滅菌器無菌效果的驗證是一個必須引起重視的問題。